（1）将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4℃离心15min，吸出上清，弃去沉淀，以去除大的聚合物。

（2）一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心，小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4℃离心1h左右，弃上清，将沉淀以原体积的0.02mol./l TBSpH8.2（内含1%BSA，0.05%叠氮钠）溶解，重复离心2～3次，沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4℃保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂，上述粗提制剂可用10%～30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心，分带收集不同大小颗粒的胶体金标记蛋白制剂。

几种免疫金探针离心所用转速（见表5-6），离心纯化时所用转速见表5-7，胶体金的OD值见表5-8。

表5-6 几种免疫金探针离心时所用转速参考表

胶体金颗粒直径（nm）蛋白质时间（min）转速（r）3.0GAR IgG60300005.0GAR IgG502500010.0RAM IgG501900015.0SPA401700015.0ALcc IgG401700020.0SPA401300025.0SPA3512000

说明：GAR IgG=羊抗兔IgG；RAm IgG=兔抗鼠IgG；ALcc IgG=抗肝细胞癌IgG; SPA=葡萄球菌A蛋白

表5-7 几种免疫金探针离心纯化时所用转速

胶体金颗粒（nm）pH蛋白质转速（xg）时间（min）59.0羊抗人IgG4500045108.2抗胃癌单克隆抗体4500030156.5链霉亲和素1200045206.0SPA1200030

将纯化好的胶体金用0.02mol/l TBS缓冲液作1：20稀释，用520nm测OD值。

表5-8 不同大小胶体金的OD值

胶体金颗粒大小（nm）OD（520）nm52.5102.5153.5205.0